张芮菁职业博客
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一、DNA的复制的特征
1.半保留复制 在DNA复制时,亲代的每一条链均可作为模板合成一条新链。一条来自亲代的旧链与一条新链以氢键相连,形成子代双链DNA。由于两个子代分子中各有一条链来自亲代,而另一条链是新生成的,所以这就是半保留复制方式。
2复制的起始点与方向 DNA分子复制时,在亲代分子的一个特定区域内双链打开,随之以双链为模板复制生成两个子代DNA双链分子。开始时,复制起始点呈现一叉形(或Y形),称为制叉复,随复制进行,复制叉向前移动。
(1)复制的起始点。 DNA复制要从DNA分子的特定部位开始,此特定部位称为复制起始点。在原核生物中复制起始点常位于染色体的一个特定部位,即只有一个起始点。真核生物的染色体在几个特定部位进行DNA复制,有多个复制起点。
(2)复制的方向。 从两个起始点开始,沿两个相反的方向各生长出两条链,形成两个复制叉,这种方式最为常见,称为双向复制。
3.半不连续合成
DNA的双螺旋结构中的两条链是反向平行的,当复制开始解链时,亲代DNA分子中一条母链的方向为5’~3′,另一条母链的方向为3′~5′。DNA聚合酶只能催化5′~3′合成方向。在以3′~5′方向的母链为模板时,复制合成出一条5′~3′方向的前导链,前导链的前进方向与复制叉的行进方向一致,前导链的合成是连续进行的。而另一条母链仍以3′~5′方向作为模板,复制合成一条5′~3′方向的随从链,因此随从链会成方向是与复制叉的行进方向相反的。随从链的合成是不连续进行的,先合成许多片段,即冈崎片段。最后各段再连接成为一条长链。由于前导链的合成连续进行的,而随从链的合成是不连续进行的,所以从总体上看DNA的复制是半不连续复制。
二 复制的过程和参与酶及因子
复制的过程分四个阶段。第一阶段,亲代DNA分子超螺旋的构象变化及双螺旋的解链,将复制的模板展现出来。第二阶段为复制的引发阶段,有引物RNA进行5′~3′方向的合成。第三阶段为DNA链的延长,在引物RNA合成基础上,进行DNA链的5′~3′方向合成,前导链连续地合成出一条长链,随从链合成出冈崎片段。去除RNA引物后,片段间形成了空隙,DNA聚合酶作用使各个片段靠近。在连接酶作用下,各片段连接成为一条长链。第四阶段为终止阶段,复制叉行进到一定部位就停止前进,最后前导链与随从链分别与各自的模板形成两个子代DNA分子,到此复制过程就完成了。
螺旋的松弛与解链 包括超螺旋的构象变化及双螺旋的解链,参与者主要为拓扑异构酶、解链酶及单链结合蛋白等。
DNA聚合酶
在原核生物及真核生物,DNA聚合酶有几种类型。
(1)原核生物大肠杆菌DNA聚合酶
1)DNA聚合酶Ⅰ。在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件。所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用。
DNA PolⅠ还具有3′→5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基。这种活性在DNA复制中起了校对功能。DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用。 DNA PolⅠ还具有5′→3′外切酶活性。5′→3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′→5′外切酶修正错误的作用。例如紫外照射产生的嘧啶二聚体,就是在其5′→3′切酶作用下切除的。
DNA Pol Ⅲ结构中不对称的二聚体,同时分别催化着前导链和随从链的合成。
DNA Pol Ⅲ也具有3′→5′外切酶活性,所以对于DNA复制也有校对的功能,可停止加入或除去错误的核苷酸然后继续加正确的核苷酸。因此,DNA PolⅢ配合DNAPolI可将复制的错误率大大地降低,从10-4降为10-6或更少。 当此片段接近前方的片段时,由DNA Pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性切除了RNA引物,造成了片段间的空间;继而DNA PolI催化进行5′→3′方向的聚合作用,填补了片段间的空隙。
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|
PolⅠ |
PolⅡ |
PolⅢ |
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酶活性 5′→3′聚合作用 3′→5′外切酶活性 5′→3′外切酶活性 |
+ + + |
+ + - |
+ + + |
|
体外链延长速度(核苷酸/分) |
600 |
30 |
9000 |
|
分子数/细胞 |
400 |
不详 |
10~20 |
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功能 |
修复合成 去除引物填补空隙 校对 |
不详 |
复制 校对 |
(2)真核生物DNA聚合酶。 真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种。
真核生物的DNA复制是在DNA聚合酶α与DNA聚合酶δ互配合下催化进行的,还有一些酶及蛋白质因子参与反应。DNA Polα与引发酶共同起引发作用,然后由DNA Polδ催化前导链及随从链的合成。DNA Polγ是线粒体中DNA复制酶。
DNA Polδ及ε均有外切酶活性,因此也有编辑功能,校正复制中的错误。它们的5′→3′外切酶活性可能在切除引物RNA中有作用。(2)真核生物DNA聚合酶。真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种。
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酶活性 5′→3′聚合作用 3′→5′外切作用 |
α |
β |
γ |
δ |
ε |
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+ - |
+ - |
+ + |
+ + |
+ + | |
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细胞内定位 功能 |
核 复制、引发 |
核 修复 |
线粒体 复制 |
核 复制 |
核 复制 |
真核生物DNA的复制特点 真核生物中复制进行的速度约为50个核苷酸/秒,仅为原核生物的1/10,但真核生物染色体上DNA复制起始点有多个,因此可以从几个起始点上同时进行复制。
你可以通过这个链接引用该篇文章:http://zrj2007.bokee.com/viewdiary.17848554.html
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